Transcriptasa inversa M-MLV (200 U/µ l)

La transcriptasa inversa del virus murino Moloney de leucemia (M-MLV) es una ADN polimerasa recombinante que sintetiza una cadena de ADN complementario a partir de ADN, ARN monocatenario o un híbrido ARN-ADN. En comparación con AMV RT, transcriptasa inversa reversa del virus murina Moloney de leucemia murina Moloney (M-MLV RT) no dispone posee actividad de endonucleasas de ADN y tiene una actividad de ARNasa H más baja. Características de esta enzima:

• Actividad termoestabilizadora óptima: a 37°C
• Tamaño de ADNc: M-MLV puede usarse para sintetizar la primera cadena de ADNc hasta 7 kb
• Aplicaciones: síntesis de la primera cadena de ADNc, extensión de cebador, secuenciación de ADNbc, bibliotecas de ADNc,

y RT-PCR Fuente
Purificada a partir de E. coli que expresa el gen pol de M-MLV en un plasmídico

Análisis de rendimiento y calidad
Pureza de SDS-PAGE; endodesoxirribonucleasa, exodesoxirribonucleasa y ribonucleasa; y rendimiento y longitud del producto de ADNc

Definición de la unidad
Una unidad de M-MLV RT es la cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmolo de desoxirribonucleótido en el material precipitado al ácido en 10 min a 37 °C utilizando poli(A)oligo(dT)25 como cebador de molde.

Condiciones de reacción unitarias
50 mm de Tris-HCl (pH 8,3), 40 mm de KCl, 6 mm de MgCl2, 1 mm de DTT, 0,5 mm [3H]dTTP, 0,1 mm de poli(A), 0,1 mm de oligo(DT)25, 0,1 mg/ml de BSA y enzima en 50 µl durante 10 min a 37 °C.

CONTENIDO Y ALMACENAMIENTO

Contiene:

• 1 x 200 μl M-MLV RT (200 U/μl) 
• 1 ml de un tampón de primera cadena 5X [250 mm de Tris-HCl (pH 8,3), 375 mm de KCl, 15 mm de cloruro magnésico]
• 500 μl 100 mm de DTT
• Almacenar a -20ºC